avigation
瓊脂糖核酸電泳實驗操作流程
1.用蒸餾水將制膠模具和梳子沖洗干凈,放在制膠平板上,封閉模具邊緣,架好梳子;
2.根據(jù)欲分離DNA大小用凝膠緩沖液配制適宜濃度的瓊脂糖凝膠:準確稱量瓊脂糖干粉,加入到配膠用的三角燒瓶內(nèi),定量加入電泳緩沖液(一般20~30 ml);
3.放入到微波爐內(nèi)加熱熔化。冷卻片刻,加入一滴熒光染料,輕輕旋轉(zhuǎn)以充分混勻凝膠溶液,倒入電泳槽中,待其凝固;
4.室溫下30~45分鐘后凝膠*凝結(jié),小心拔出梳子,將凝膠安放在電泳槽內(nèi);
5.向電泳槽中倒入電泳緩沖液,其量以沒過膠面1mm為宜,如樣品孔內(nèi)有氣泡,應(yīng)設(shè)法除去;
6.在DNA樣品中加入10×體積的載樣緩沖液(loading buffer),混勻后,用槍將樣品混合液緩慢加入被浸沒的凝膠加樣孔內(nèi);
7.接通電源,紅色為正極,黑色為負極,切記DNA樣品由負極往正極泳動 (靠近加樣孔的一端為負)。一般60~100V電壓,電泳20~40min即可;
8. 根據(jù)指示劑泳動的位置,判斷是否終止電泳;
9.電泳完畢,關(guān)上電源,在凝膠成像儀上觀察電泳帶及其位置,并與核酸分子量標準Marker比較被擴增產(chǎn)物的大小。
瓊脂糖凝膠濃度與線形DNA的分辨范圍
瓊脂糖凝膠濃度線形DNA的分辨范圍(bp)
0.5%1,000~30,000
0.7%800~12,000
1.0%500~10,000
1.2%400~7,000
1.5%200~3,000
2.0%50~2,000